發(fā)布時間：2013-08-30 09:45:11點擊數(shù)：2160次
在活細胞中以原子分辨率確定蛋白的三維結構，對結構生物學家來說是一大挑戰(zhàn)。本期nature報告的兩項進展，應能拓寬這一領域中一項很有希望的方法——細胞內(nèi)nmr光譜的應用范圍。以前，光譜方法較低的靈敏度及樣本的短壽命，使得人們難以獲得足夠的結構信息來用這種方法確定蛋白結構。為nmr實驗收集數(shù)據(jù)一般需要一到兩天時間，這對活細胞來說太長了。sakakibara等人通過在2至3個小時內(nèi)收集到足夠數(shù)據(jù)而克服了這一局限。他們報告了完全根據(jù)在活大腸桿菌中獲得的信息確定的第一個三維蛋白結構。
該原理證明研究中所用模型蛋白，是來自嗜熱菌的假設的重金屬結合蛋白ttha1718。此前，活細胞的細胞內(nèi)nmr光譜僅限于細菌和非洲爪蟾卵母細胞，對活真核細胞的廣泛應用受到向這些細胞中輸送同位素標記蛋白效率相對較低的限制?，F(xiàn)在，inomata等人發(fā)現(xiàn)，通過細胞穿透肽由吡啶酸調(diào)控的作用，有可能將合適標記的蛋白輸送到人細胞的細胞液中，所用細胞穿透肽通過共價鍵與目標蛋白相結合。當輸入的蛋白被內(nèi)生酶活性或自體還原裂解作用釋放時，研究人員便能夠獲得活的人細胞內(nèi)蛋白質的高分辨率二維異核nmr光譜。這一方法有可能成為以細胞內(nèi)蛋白為作用目標的藥物的設計及篩選工作的一個強大工具。
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